摘要：病原生物學是研究病原生物的形態(tài)、結構、生命活動規(guī)律以及與機體相互作用關系的一門學科，主要包括醫(yī)學微生物學和人體寄生蟲學。醫(yī)學微生物學主要研究病原微生物與人類疾病的關系問題，包括研究病原微生物的生命特征或生物學特性，致病性與致病機理、感染與免疫、特異性診斷和防治等問題； 人體寄生蟲學是研究人體寄生蟲的形態(tài)結構、生活史、致病機制、實驗診斷、流行規(guī)律與防治措施的一門科學；免疫學是研究機體免疫系統(tǒng)的組成、結構與功能、免疫應答的發(fā)生機制以及免疫學在疾病診斷與防治中應用的一門科學。
一. 實驗要求
1. 實驗前必須掌握與實驗相關的醫(yī)學微生物學、醫(yī)學寄生蟲學及醫(yī)學免疫學基礎理論。做好預習，明確實驗目的與實驗內容。
2. 對于設計性實驗，在老師的指導下，注意發(fā)揮自身潛能，勤于思考，靈活掌握所學知識。
3. 在實驗過程中做到三嚴：嚴肅、嚴格、嚴謹。如實記錄實驗結果，按規(guī)定完成實驗報告。對于失敗實驗結果要分析原因，必要時重復實驗。
4. 嚴格遵守實驗室規(guī)則。
二. 實驗室規(guī)則
1.進實驗室穿工作服，離開時脫下，反折。
2.除必需教材、文具外，其他物品禁止帶入實驗室。
3.按規(guī)定位置就坐。保持實驗室安靜，不得隨意走動、進出。
4.實驗室內禁止飲食、吸煙。謹防經(jīng)口感染病原。
5.實驗操作應嚴格按實驗指導和教師的要求進行。
6.實驗過程中若不慎將傳染性標本污染桌面、手及其他物品時，應立即報告老師緊急處理，不得擅自處理。常見處理如下：
（1）皮膚破傷：先除盡異物，用無菌生理鹽水洗凈后，涂以2%紅汞或2%碘酒，必要時進行包扎。
（2）灼傷：涂以凡士林油，5%鞣酸或2%苦味酸。
（3）化學藥品腐蝕傷：若為強酸，先用大量清水沖洗，再以5%碳酸氫鈉或氫氧化銨溶液洗滌中和之；強堿腐蝕傷，則先以大量清水沖洗后，再用5%醋酸或5%硼酸溶液洗滌中和之。若受傷部位是眼部，經(jīng)過上述步驟處理后，zui后滴入橄欖油或液體石
臘1、2 滴，滋潤之。
（4）吸入病菌菌液：應立即吐入盛有消毒液的容器內消毒，并用1：1000高錳酸鉀漱口；根據(jù)菌類不同，必要時需服藥預防。
（5）細菌污染衣物：應立即脫下，放入3%來蘇爾或3%氯胺液內浸泡半小時，或仔細包好經(jīng)高壓蒸汽消毒后清洗。
（6）菌液污染桌面：傾倒適量2-3%來蘇爾或0.5% 84 消毒液于污染處，浸泡半小時后抹去。若手上沾有活菌，應浸泡于上述消毒液10-20 分鐘后，再以肥皂水沖刷之。
7.看示教時，未經(jīng)允許，不得移動顯微鏡推進尺。
8.愛護實驗室器材及設備，認真填寫實驗設備使用紀錄。不慎發(fā)生損壞時，應立即報告老師，照章賠償。
9.實驗結束后，凡使用過的實驗器材必須放在地點，如吸過菌液的吸管，毛細吸管要投入含有2-3%來蘇爾或0.1%新潔爾滅的玻璃筒中，或置“待消毒”處，不得放在桌上，亦不可沖洗于水槽內。用過的波片也應放于含有消毒液的容器內。需要培養(yǎng)的實
驗材料集中后放入溫箱中培養(yǎng)。
10.實驗完畢，應及時清理實驗室（包括桌面，地面，試驗用具等），值日生打掃室內衛(wèi)生，管好門窗、水電。離開實驗室前，將雙手在消毒液內浸泡3-5分鐘，再用清水洗凈，方可離室。
三. 顯微鏡的使用
（一）普通光學顯微鏡的基本結構
光學顯微鏡的基本結構包括光學和機械兩個部分。光學部分主要有目鏡、物鏡、鏡筒、內置光源（或反光鏡）、光闌等；機械部分包括鏡座、鏡臂、調節(jié)螺栓、載物臺、夾持器、
轉換器、粗調焦手輪及細調焦手輪等。（見圖1-1）
圖1 光學顯微鏡的基本結構示意圖
（二）顯微鏡（油鏡的使用）
顯微鏡的物鏡一般有低倍鏡、高倍鏡及油鏡。病原生物學實驗中zui常用者為油鏡。
1.油鏡的原理 使用油鏡時需在玻片上滴加香柏油。由于從標本玻片上透過的光線，因介質密度不同，部分光線發(fā)生折射散失，使射入物鏡光線減少（高倍鏡孔徑較大，影響不顯著），因油鏡的孔徑較小，進入的光線則不夠，致使物象顯現(xiàn)不清。當在油鏡與標本片之間加香柏油后，香柏油折射率（n=1.515）和玻璃的折射率（n=1.52）,因此可增加進入透鏡的光線，使視野亮度加強。
2. 在油鏡頭上常有下列幾種標記：①放大倍數(shù)是90×或100/；若鏡筒的長度不變，顯微鏡的放大倍數(shù)=目鏡倍數(shù)乘以物鏡的倍數(shù)。②鏡頭下緣有一白色線圈或黑色線圈；③刻有
“油”或外文“HI”、“Oel”、“Oil”等字樣。④油鏡頭的長度大于低倍鏡和高倍鏡。
3. 使用方法
① 對光 轉動轉換器，將低倍鏡鏡頭（4 倍、10 倍）轉至載物臺中央透光孔位置，打開透光光闌，對光，直至目鏡中出現(xiàn)光線zui明亮、zui均勻的視場為止。顯微鏡的光源可分為內置光源和外置照明。內置光源：接通電源，按下底座的開關，電源打開即可。外置光源：將光圈放到zui大位置，在用眼睛觀察目鏡的同時，轉動反光鏡使其朝向光源（自然光或燈光），使視野中的光線zui明、均勻。如靠近光源，可用平面反光鏡，如距光源較遠，可用凹面反光鏡。根據(jù)所觀察的標本，升降集光器和縮放光圈，以獲*光度。一般染色標本用油鏡檢查時，光度宜強，可將光圈開足，集光器上升至與載物臺相平；檢查未染色標本用低倍鏡或高
倍鏡觀察時，應適當縮小光圈，下降集光器，使光度減弱。
② 裝片 將標本片放置在工作臺的夾持器中，用夾持起移動標本片至工作臺開口中心（透光孔處）。
③ 調節(jié)焦距 通過旋轉粗調焦手輪，將載物臺升到zui高限定位置（制片不能觸到物鏡），此時已準備好調焦。使用4 倍或10 倍物鏡，在目視目鏡的同時，旋轉粗調手輪，使工作臺緩慢下降，在目視目鏡中觀察到的清晰的圖像時，再調節(jié)光闌聚光鏡孔，選擇與物鏡相匹配的孔，調節(jié)微調焦手輪，使視野中的圖像zui清晰。用低倍鏡找出標本的范圍，然后提高鏡筒，在標本的待檢部位加一小滴香柏油，慢慢將油鏡頭浸于油中，但勿接觸玻片。然后，自目鏡處一面觀察，一面微轉動粗調節(jié)器，使鏡筒徐徐上升，待看到模糊物象時，改用細調節(jié)器調至物象清晰。如果是滴片標本，先滴一滴標本在玻片上，輕輕蓋上蓋玻片。加蓋玻片時，先將蓋玻片的一邊與在玻片上的水滴邊緣接觸，然后自一側輕輕放下，先在低倍鏡下觀察，然后在高倍鏡下觀察，通過改變光圈的大小或轉動細調焦手輪。
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